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一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法 /一种基于点击反应的还原糖定量检测方法

授权（专利）号：CN201310208383.7（发明专利）
发明（设计）人：黄和;张洋;江凌;胡燚;李晓彤;张红漫
摘要：
本发明属于酶工程技术领域，涉及一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法。本发明以枯草芽孢杆菌脂肪A为研究对象，首先筛选突变热点区域；再确定位于蛋白质表面且柔性较大区域的氨基酸位点；结合上述两步理性分析，筛选得到的氨基酸位点突变成天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸四种氨基酸残基的任意一种，并以该氨基酸为中心，在4?范围内寻找上述4种氨基酸中带相反电荷的氨基酸残基，从而确定突变位点及突变残基；基于对酶结构与功能关系的认知，再解析离子键引入对稳定枯草芽孢杆菌脂肪脂肪酶A蛋白结构的作用机制；最终，通过枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变株的热稳定性实验，验证热稳定性改造的热点残基。